PicoGreen dsDNA Reagent  双链DNA检测试剂

产品关键词

Picogreen dsDNA Reagent；双链DNA检测试剂；RiboGreen；RNA定量试剂；ssDNA定量试剂；药物残留DNA检测；

产品信息

【温馨提示】：Piocgreen具有细胞膜渗透性，目前大量的文章利用Picogreen的这一特性，来进行细胞内DNA（包括mtDNA）的染色，我司（懋康生物）针对这一应用，列出活细胞水平用picogreen进行染色的操作流程作为参考，具体的染色浓度和时间，以及染色步骤可自行优化。

Picogreen细胞染色的流程（活细胞）：

1）细胞培养过夜； PBS清洗1-2次；

2）加入新鲜配制的Picogreen 染色工作液（用HBSS、HHBS或无血清培养基等稀释），室温或37℃避光孵育30-60min。Picogreen的染色稀释倍数：1：50-1：500倍稀释，最佳工作浓度自行摸索；我们用来做定量的工作浓度在1：200倍；

3）染色结束，PBS 清洗1-2次；

4）加入抗荧光淬灭剂（比如：MM1401-5ML）封片后成像观察。使用488nm激发器，FITC滤片观察。

产品描述

Picogreen是一种极为灵敏的荧光核酸染料，常用于双链DNA的定量检测。历来DNA浓度的测定在cDNA文库的构建，DNA亚克隆、PCR产物的估测等领域中具有重要意义，疫苗等生物制品中残留微量DNA的检测更是直接关系到人类的健康。

Picogreen dsDNA定量检测：Picogreen仅在与DNA双链结合后才发出荧光，且所产生的荧光与DNA浓度呈正比，在存在ssDNA、RNA和单体核苷酸的条件下，可以选择性地检测低至25pg/ml的dsDNA。该分析在三个数量级范围内呈线性，且几乎无序列依赖性，可以精确地测量多个来源的DNA，包括基因组DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR扩增产物。

相比传统的方法，Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下优势：①灵敏度高：数量级较UV吸光读数更敏感，可节省宝贵的样品；②特异性强：在等摩尔的RNA存在的条件下，对dsDNA具有特异性；③耐受性好：耐受较高浓度的盐、尿素、乙醇、氯仿、去垢剂、蛋白或琼脂糖，可以直接定量PCR扩增产物而无需从反应混合物中纯化DNA。④易于使用——只需在样品中加入染料，等待5分钟，然后读数即可，且适用于96和384孔板；与大多数基于荧光的酶标仪和荧光计兼容。⑤适用范围广：可适用于PCR的分析、芯片样品、DNA损伤分析、酶活性分析、基因组DNA定量以及复杂混合物中dsDNA的检测和病毒DNA定量等多种领域。

我司（懋康生物）可根据用户需求提供多种规格的Picogreen双链DNA检测试剂（PicoGreen dsDNA Reagent），本品以溶于DMSO的母液形式提供，浓度为0.1mg/ml。若按照2ml反应体系来计算（比色皿），10×100 µL规格可做200次反应；若按照200µl反应体系来计算（96孔板），10×100 µL规格可做2000次反应；单次反应体系取决于荧光检测仪器。

保存与运输方法

保存：2-6℃避光保存，亦可置于-20℃避光保存。至少1年有效。

运输：冰袋运输。

注意事项

1） Picogreen含DMSO（已知有毒试剂），操作时请注意防护。

2） Picogreen的详细操作可参考我司提供的PicoGreen dsDNA Assay Kit（货号：MF0781）的说明书。

3） 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

应用示例（荧光定量）：

应用示例（picogreen的荧光染色）

文献来源1）：Ho SS, Zhang WY, Tan NY, Khatoo M, Suter MA, Tripathi S, Cheung FS, Lim WK, Tan PH, Ngeow J, Gasser S. The DNA Structure-Specific Endonuclease MUS81 Mediates DNA Sensor STING-Dependent Host Rejection of Prostate Cancer Cells. Immunity. 2016 May 17;44(5):1177-89. doi: 10.1016/j.immuni.2016.04.010. Epub 2016 May 10. PMID: 27178469.

Fig. Genome-Derived DNA Accumulates in the Cytosol of Prostate Cancer Cells
(A) Murine TRAMP-C2, human DU145 and human PC-3 prostate cancer cells were labeled with antibodies against dsDNA (red) and the mitochondrial marker COX IV (green) in the presence of DAPI (blue). Z stacks were acquired by confocal microscopy and 3D iso-surface rendered using Imaris software to exclude mitochondrial and nuclear DNA.
(B) TRAMP-C2, DU145, and PC-3 cells were labeled with 3 ml/ml of the dsDNA-specific dye PicoGreen (green) for 1 hr and with 100 nM mitochondria-specific dye MitoTracker (red) for 30 min. Z stacks were acquired by confocal microscopy and 3D iso-surface rendered using Imaris software to exclude mitochondrial DNA.

附表PicoGreen定量耐受的污染物列表

  — —Written/Edited by V. Shallan【版权归MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科学和生物技术领域研究的试剂、仪器和实验室消耗品与实验服务工作，主要从事细胞生物学、植物学、分子生物学、免疫学、生物化学、蛋白组学。生物制药与诊断试剂研发生产等领域。 本公司秉承“以人为本，以诚为信、合同守信”的经营理念。坚持"品质保障"的原则为广大客户提供优质产品。